מטבוליזם דנ"א ובקרתו

תקציר העבודה:

תוכן עניינים:
1. הגישה הגנטית.
2. הגישה הביוכימית.
3. דיון.
4. ביבליוגרפיה.

מבוא

החלבון RPA - Replication protein A הקושר דנ"א חד-גדילי בשמר, שייך למשפחה גדולה של SSB - Single stranded DNA binding proteins.
החלבון RPA בודד לראשונה מתמצית תאי אדם, כמרכיב חשוב להכפלת הדנ"א של הוירוס 40SV.
זהו חלבון הטרוטרימרי (מורכב מ3 - תת-יחידות) ומצוי גם בתאים אוקריוטים נוספים.
בין תפקידיו העיקריים: השתתפות בהכפלת דנ"א, תיקון דנ"א ורקומבינציה.
לחלבון RPA נקשרים חלבונים נוספים המשתתפים יחדיו בויסות מטבוליזם של דנ"א וייתכן גם בויסות ביטויים של גנים.
בתאים של אוקריוטים שונים אפשר למצוא הומולוגיות גבוהה, ורוב המחקר התבסס על חלבונים מאדם ומשמר. יש לציין שהחלבון משמר אינו מגיב עם נוגדנים כנגד החלבון ממקור אדם אך יכול להחליף את החלבון ממקור אדם במערכת (2).40SV
מערכת 40SV אינה מספיקה דיה לבחינת פעילות הכפלת דנ"א ופעילויות פונקציונאליות אחרות, מכאן שהיה צורך להגיע למערכת מודל אוקריוטית שנבחנה בשמר Saccharomyces .cerevisiae
בחלבון המצוי בשמר ניתן למצוא 4 אתרי קשירה: תת היחידה הגדולה RPA1 כוללת שני אתרי קשירה (A,B) ואילו תת היחידות הקטנות RPA2 וRPA3 - כוללות כל אחת אתר קשירה בודד (C וD - בהתאמה).
בחיידקים (E.coli) החלבון נקרא Ecssb, ומורכב מ4 - תת יחידות זהות (19Kb כל אחת).
החלבון החיידקי מבצע את רוב הפעולות שמבצע החלבון RPA בשמר למרות הדמיון החלש בין שני החלבונים, ואינו יכול להחליף את פעילות חלבוני SSB באדם ובשמר.
החלבונים מאדם ומשמר מראים עדיפות בקשירה לפוליפירמידינים אך הפרטים המולקולריים עדיין לא ברורים.
במאמרים המרכזיים (23,4,) מאופיינים ארבעת האתרים קושרי דנ"א חד-גדילי בחלבון RPA משמר בהשוואה לזה שב.E. coli -
בכל אתר קשירה ישנן שתי חומצות אמיניות ארומטיות מרכזיות בעלות חשיבות לקשירה וחיות השמר והן כנראה הבסיס לפעילות המקבילה של שני החלבונים משמר ומחיידק למרות המרחק האבולוציוני ביניהם.
התוצאות מחזקות את הדעה שהחלבון RPA משמר נובע מהכפלתו של גן-אב קדום, וארבעת האתרים קושרי דנ"א חד-גדילי חשובים לתכונות הפונקציונאליות של חלבוני SSB.
בעבודה זו אציג את הדרך שבה אופיין החלבון RPA משמר תוך שימוש בגישות גנטיות וביוכימיות עד לקביעת מודל מבני של החלבון ובכך חשיבותה.

מקורות:

Bochkarev A. , Pfuetzner RA. , Edwards AM. , Frappier L. (1997) Structure of the Single-Strand-DNA-Binding Domain of Replication Protein A Bound to DNA. Nature 385 : 176-181.
Brill J. S. , Bastin-Shnower S. (1998) Identification and Characterization of the Fourth Single-Stranded-DNA Binding Domain of Replication Protein A. Mol. Cell. Biol. 18 : 7225-7233.
Brill J. S. , Stillman B. (1991) Replication factor-A from Saccharomyces cerevisiae is Encoded by Three Essential Genes Coordinately Expressed at S Phase. Genes Development. 5 : 1589-1600.
Philipova D. , Mullen J.R. , Maniar H.S. , Lu J. , Gu C. and Brill S.J. (1996) A Hierarchy of SSB Protomers in Replication Protein A Genes Development. 10 : 2222-2233
Rothstein R.J. (1983) Methods in Enzymology 101: 202.
Wold S.M. (1997) Replication Protein A : A Heterotrimeric, Single-Stranded DNA-Binding Protein Required For Eukaryotic DNA Metabolism. Annu. Rev. Biochem. 66 : 61-92.

תגים:

ביוכימיה · מולקולרי · apr · אפיון · גדילי · הכפלת · חלבון · מטבוליזם · שיטות · שמרים

אפשרויות משלוח:

ניתן לקבל ולהזמין עבודה זו באופן מיידי במאגר העבודות של יובנק. כל עבודה אקדמית בנושא "מטבוליזם דנ"א ובקרתו", סמינריון אודות "מטבוליזם דנ"א ובקרתו" או עבודת מחקר בנושא ניתנת להזמנה ולהורדה אוטומטית לאחר ביצוע התשלום.

אפשרויות תשלום:

ניתן לשלם עבור כל העבודות האקדמיות, סמינריונים, ועבודות המחקר בעזרת כרטיסי ויזה ומאסטרקרד 24 שעות ביממה.